HPLC法测定盐酸伊伐布雷定及其片剂中有关物质的研究

摘要：目的 建立高效液相色谱法（HPLC）测定盐酸伊伐布雷定原料及其片剂中有关物质的方法。方法 采用C18色谱柱，以缓冲盐溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，检测波长为286 nm，柱温30℃，流速1.0 mL/min。结果 盐酸伊伐布雷定与各有关物质分离良好，方法精密度、重复性、专属性、耐用性均符合要求，检测限和定量限灵敏。结论 该方法简便、准确、专属性强，可用于盐酸伊伐布雷定及其片剂中有关物质的控制。

关键词：盐酸伊伐布雷定；有关物质；高效液相色谱法；质量控制

1 引言

盐酸伊伐布雷定（Ivabradine hydrochloride）是一种选择性窦房结If电流抑制剂，临床上用于治疗慢性稳定型心绞痛和慢性心力衰竭。随着其制剂的大规模生产与应用，对药品质量控制的要求日益严格。有关物质是评价药品纯度与安全性的重要指标，需建立专属性强、灵敏度高的分析方法。本文参照相关指导原则，建立HPLC法同时测定盐酸伊伐布雷定原料及片剂中的有关物质，方法学验证结果表明该方法适用于质量控制。

2 仪器与试药

2.1 仪器

高效液相色谱仪（Agilent 1260系列，配紫外检测器）；色谱柱（Waters XBridge C18，250 mm×4.6 mm，5 μm）；电子分析天平（感量0.01 mg）；超声波清洗器；pH计。

2.2 试药

盐酸伊伐布雷定对照品（含量99.5%）；盐酸伊伐布雷定片（规格5 mg）；杂质对照品（伊伐布雷定杂质A、B、C等）；乙腈（色谱纯）；磷酸二氢钾（分析纯）；磷酸（分析纯）；水为超纯水。

3 方法与结果

3.1 色谱条件

色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相A：0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0），流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0→30 min，A从90%→50%，B从10%→50%，保持10 min；检测波长：286 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL。

3.2 溶液制备

3.2.1 供试品溶液

取盐酸伊伐布雷定片20片，研细，称取适量（约相当于盐酸伊伐布雷定25 mg），置25 mL量瓶中，加流动相A-乙腈（80:20）适量，超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

3.2.2 对照品溶液

精密称取盐酸伊伐布雷定对照品适量，加流动相A-乙腈（80:20）溶解并稀释制成每1 mL中含0.01 mg的溶液，作为对照品溶液。

3.2.3 杂质对照品溶液

分别精密称取各杂质对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中含0.01 mg的混合溶液，作为系统适用性溶液。

3.3 方法学验证

3.3.1 专属性试验

取供试品溶液、对照品溶液、杂质混合溶液及空白溶剂分别进样分析。结果表明，主峰与相邻杂质峰分离度均大于1.5，空白溶剂无干扰，方法专属性良好。

3.3.2 检测限与定量限

将对照品溶液逐级稀释，以信噪比3:1确定检测限（LOD），信噪比10:1确定定量限（LOQ）。结果盐酸伊伐布雷定的LOD为0.6 ng，LOQ为2.0 ng。

3.3.3 线性与范围

精密量取对照品溶液，稀释制成系列浓度溶液，进样测定。以峰面积对浓度进行线性回归，回归方程为Y=2.35×10^4X+1.03×10^4，r=0.9999，表明在0.1~100 μg/mL范围内线性关系良好。

3.3.4 精密度与重复性

取同一批供试品溶液，连续进样6次，主峰面积RSD为0.50%，表明仪器精密度良好。取同一批样品6份，按供试品溶液制备方法操作，测定有关物质含量，RSD为0.80%，表明方法重复性良好。

3.3.5 稳定性试验

供试品溶液室温放置0、2、4、8、12 h后进样，主峰面积RSD为0.72%，表明溶液在12 h内稳定。

3.3.6 加样回收试验

精密量取已知有关物质含量的供试品溶液，加入等量杂质对照品溶液，按色谱条件测定，计算回收率。各杂质回收率在98.5%~101.2%之间，RSD均小于3.0%，方法准确度良好。

3.4 样品测定

取三批盐酸伊伐布雷定片，按上述方法制备供试品溶液并测定有关物质。结果显示，各批样品中单个杂质均低于0.2%，总杂质低于0.8%，符合限度要求（单个杂质≤0.2%，总杂质≤1.0%）。

4 讨论

本实验采用梯度洗脱HPLC法，优化了流动相组成和梯度程序，使伊伐布雷定与多个已知杂质得到良好分离。考察了不同pH的缓冲盐和柱温对分离的影响，确定了最佳条件。方法学验证结果表明，该方法专属性强、灵敏度高、精密度好，能有效检测盐酸伊伐布雷定及其片剂中的有关物质，为质量控制提供了可靠依据。与文献方法相比，本方法简化了样品前处理，缩短了分析时间，适用于常规检测。

5 结论

建立了盐酸伊伐布雷定原料及其片剂中有关物质测定的HPLC方法，方法学验证满足要求，可用于盐酸伊伐布雷定及其片剂的质量控制。

参考文献：

[1] 中国药典2020年版.二部[S].2020.

[2] ICH Q2(R1) Validation of Analytical Procedures[S].2005.

[3] 王某某,李某某.HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片的含量及有关物质[J].药物分析杂志,2021,41(3):456-461.

[4] 张某某.盐酸伊伐布雷定原料药有关物质分析方法研究[D].某某大学,2019.